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磷酸化蛋白WB检测
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磷酸化蛋白WB检测

蛋白背景调研 实验前了解蛋白自身的属性和背景是非常重要的,一般需要查阅文献或通过预实验检测样本是否表达目的位点的磷酸化蛋白。若正常情况下样本的磷酸化水平过低或不表达,可通过物理或化学方法进行一定的刺激和诱导,正确的刺激会帮助得到最佳实验结果,值得注意的是,刺激的时间和强度也需查阅文献和进行预实验来确定。 通过数据库PhosphoSitePlus,UniProt,dbPTM查询蛋白的相应位点磷酸化情况 实验操作注意事项 1. 在磷酸化蛋白提取中的“快准冷” 快,制样快,操作快; 准,实验步骤以及各类试剂添加准确;

Western Blot (WB)异常条带
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Western Blot (WB)异常条带

1. 无背景无条带 原因分析: 如果 marker 正常,其他位置没有条带,最可能是一抗加成其他抗体,或者二抗种属加错了,比如兔的加成鼠的。 解决办法: * 目的蛋白完全无信号,但同时做的内参是正常的,那么大部分情况是一抗抗体失效或用错二抗。 * 目的蛋白和内参均无信号,则考虑是否发光液失效。如果膜上没有 marker 则为转膜失败。 * 如果中间出现了细微条带,

常用蛋白质RNA数据库
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常用蛋白质RNA数据库

人类基因组以及多种模式生物、重要生物基因组全序列的完成,标志着生命科学研究进入“后基因组时代 (Postgenome era)”,即功能基因组学(Functional Genomics),如蛋白质组学、代谢组学、营养组学。 功能基因组学从基因整体水平上对生命的活动规律进行阐述,并力求从细胞水平上解决基因组问题,通过建立对生命现象的整体认识,阐明生物体内蛋白质表达模式与功能模式、解决细胞水平上的基因组问题;蛋白质组逐渐成了功能基因组学的最重要部分之一,随着蛋白质组学的深入研究产生了非常庞大的数据,我们对蛋白质组学和蛋白相关的数据库进行了简单的整理,